半乳醣結合微脂粒點鼻疫苗之黏膜免疫研究

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題名:	半乳醣結合微脂粒點鼻疫苗之黏膜免疫研究
其他題名:	Galactose conjugation of liposome for mucosal delivery vaccine by nasal immunization
作者:	王筱雯 Wang, Hsiao-Wen
貢獻者:	生醫材料暨工程研究所;王筱雯
日期:	2010-07-01
上傳時間:	2010-10-20 11:21:31 (UTC+8)
摘要:	黏膜免疫系統是宿主對抗大多數外來病原體的第一道防線，主要是利用分泌性免疫球蛋白A（sIgA）來防止病原體入侵，避免宿主產生疾病。因而本實驗進行黏膜疫苗之研究，為求疫苗標靶導向於黏膜之抗原呈獻細胞，我們先將半乳糖與DLPE合成為galactosyllipid，再嵌入微脂粒製成標靶型微脂粒。從鼻黏膜的部位施予不同疫苗：半乳糖標靶微脂粒疫苗、半乳糖塗覆在微脂粒外及包覆抗原的微脂粒。因此，期望以點鼻給予半乳糖標靶微脂粒可能是一個有用的疫苗誘導黏膜免疫抵禦病原體。本實驗以卵白蛋白 ( OVA, ovalbumin ) 作為標準抗原，設計的實驗組別為控制組、包覆OVA之微脂粒、半乳醣接枝包覆OVA之微脂粒、及半乳糖塗覆在包覆OVA之微脂粒外層。實驗動物為六週齡 BALB/c 雌鼠，在第六週給予第一次點鼻接種，在第八週給予第二次點鼻接種。第二次疫苗接種完後，於第十週犧牲實驗動物，收集其血清、鼻沖洗液及肺沖洗液，以酵素連結免疫分析法（ELISA)測量其血清與沖洗液中的sIgA、IgG 及 IgG subtype 抗體生成量，比較不同的疫苗對於 BALB/c 老鼠黏膜特異性抗體及血清中特異性抗體的影響。細胞實驗方面，我們觀察半乳糖標靶微脂粒疫苗刺激巨噬細胞後的 TNF 生成量，同時，以雷射共軛焦顯微鏡觀察不同實驗組別培養的巨噬細胞攝入微脂粒疫苗的情形。本實驗顯示半乳糖標靶微脂粒疫苗給予小鼠，能夠在黏膜與血清中產生較多的 sIgA 及 IgG 抗體，同時刺激細胞後產生較多的發炎反應，而細胞攝入後的螢光含量也是最多，證實鼻腔黏膜部位的抗原呈獻細胞能夠攝入較多量的半乳糖標靶微脂粒疫苗。 Mucosal immune system is the first line of defense against foreign pathogens that prevents adherence of pathogens through secretory IgA (sIgA) to maintain the integrity of the mucosal lining. Thus this experiment for develop the mucosal vaccine , for the sake of direct target on the mucous membrane of the antigen-presenting cells﹙APCs﹚.We intranasally immunized administration of monosaccharide conjugate liposomes, compared with monosaccharide coating liposomes and antigen in uncoated liposomes. Female BALB/c mice (6 week old) were used in the study. Mice were immunized by a nasal route with OVA encased in monosaccharide conjugate to liposomes , OVA encased in unconjugated liposomes , and OVA encased in monosaccharide coating liposomes on week 6 and 8. At week 10, mice were sacrificed to collect the serum and nasal washes. We analyze the IgG, IgG subtype and sIgA antibodies. The antibody-producing capacity with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to assess the vaccine to stimulate the mices ability to generate immune responses. We use macrophage (RAW264.7 cell) to observed the vaccine ability by measuring TNF production and confocal assay. The experiments showed that monosaccharide conjugate to liposomes for mice, could produce mucosa and serum site more sIgA and IgG antibodies , and stimulate macrophage to produce more inflammation.
關聯:	57頁
描述:	碩士指導教授:劉得任委員:商惠芳委員:梁碧惠
顯示於類別:	[生醫材料暨組織工程研究所] 博碩士論文

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